В миру Подобедов Андрей Иванович, родился в селе Стогове Переяславского уезда Владимирской губернии в семье священника.
С 1757 года обучался в Троицкой лаврской семинарии.
В 1764 году, по окончании курса обучения, назначен на должность учителя и библиотекаря.
12 февраля 1768 года принял монашество и переведен проповедником и учителем в Московскую Славяно-греко-латинскую академию.
С 1771 года - префект академии.
С 18 августа 1774 года - ректор академии и архимандрит Заиконоспасского монастыря.
5 июня 1778 года хиротонисан во епископа Севского.
Им организована и открыта Севская духовная семинария, учреждены духовные училища в Орле и Брянске.
25 апреля 1781 года переведен в Крутицкую епархию.
В период управления Крутицкой епархией преобразована Крутицкая духовная семинария и открыты духовные училища в Боровском и Белевском монастырях.
С 27 марта 1785 года - архиепископ Казанский и Свияжский.
В Казани преосв. Амвросий восстановил сгоревшие и обветшавшие здания академии, усовершенствовал школу для новокрещенных татар.
С 16 октября 1799 года - архиепископ Санкт-Петербургский, Эстляндский и Финляндский.
19 декабря 1800 года также назначен управляющим Новгородской епархией.
С 10 марта 1801 года - митрополит Новгородский и Санкт-Петербургский.
26 марта 1818 года по личной просьбе был освобожден от управления Санкт-Петербургской епархией и удалился в Новгород, с титулом митрополита Новгородского и Олонецкого. Поводом к удалению его послужило недовольство государя на употребление им во время крещенской церемонии облачения, опушенного горностаем, снятым с покрова гробницы великой княгини. Истинной же причиной удаления были частые столкновения митрополита с князем Голициным.
После приезда митр. Амвросия в Новгород он прожил две недели здоровым и невредимым. Однажды вошел он в Знаменский собор. Масло из лампады пред образом Богоматери нечаянно пролилось ему на голову. В тот же вечер он занемог. Следующий день провел в болезни, лекари стали обещать выздоровление. Наутро он причастился Св. Таин, сказав при этом: "Собороваться маслом не надобно, меня соборовала Богоматерь". Через некоторое время сам читал отходные молитвы и предал дух свой.
Скончался 21 мая 1818 года. Погребен в Софийском соборе в приделе св. Иоанна Предтечи.
Основным направлением деятельности преосв. Амвросия была его постоянная забота о развитии духовного просвещения в России, о поднятии умственного и нравственного уровня духовенства.
При его деятельном участии совершено преобразование духовно-учебных заведений в России.
За труды по духовному образованию преосв. Амвросий первый удостоился звания почетного доктора богословия.
Из личных качеств митр. Амвросия обер-прокурор Хвостов отмечал "мудрую кротость его нрава", князь Голицын увидел в нем "старца сговорчивого, умного и распорядительного".
Проповеди Амвросия, по словам Филарета Черниговского, "не отличаются ни блистательными картинами, ни свободным течением речи, но в них есть сила мысли и достаточная чистота русского языка".
